RJH Biosciences Inc.


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RJH Biosciences社は、カナダのアルバータ州エドモントンを拠点とするバイオテクノロジー企業です。RJH社は、様々な種類の核酸をヒト細胞や培養細胞株に運搬する今までにないトランスフェクション試薬や輸送システムを開発しています。RJH社は「生物医学の研究開発企業に向けたトランスフェクション試薬」と、「前臨床・臨床用の核酸輸送用媒体」という商業上の2つのセグメントにおいて、付加価値のある商品を開発いたします。血液癌や免疫細胞の修飾をテーマとするRJH社独自の研究開発プロジェクトでも、同様のトランスフェクション試薬が用いられています。

製品概要

各トランスフェクション試薬の特長








All-Fect

siRNA pDNAトランスフェクション試薬として設計されており、siRNAによるノックダウンやプラスミドDNAのトランスフェクション、siRNAとpDNAの同時輸送に使用できます。All-Fectは、特に臍帯血・骨髄由来の間葉系幹細胞や、高度に分化した平滑筋細胞、内皮細胞での使用に適しています。

資料をダウンロード：All-Fect Brochure

試薬の特徴：

  • 高効率のトランスフェクション

    血清の存在下で従来製品の2-3倍の効力を発揮します。

  • シンプルなプロトコル

    トランスフェクション中に組織の培養液を交換する必要がありません。

  • 毒性が低い

    市販のトランスフェクション試薬より毒性が低く、正常な細胞の生理活性の維持に優れています。

リファレンス：

  • Hsu and Uludağ. Biomaterials (2012) 33: 7834-7848.
  • Remant Bahadur et al., J. Materials Chemistry B (2015) 3: 3972-3982.
  • Wang et al., J. Surgical Research (2013) 183: 8-17.
All-fect transfection of cells GFP
写真：臍帯血由来の間葉系幹細胞にGFPプラスミドをトランスフェクションした際に見られた、All-Fectの典型的な性能。この実験ではAll-Fectと他社のリポフェクション試薬をそれぞれの最適条件下で使用し、性能を比較しています。導入遺伝子の発現の度合いは、任意単位でのEGFPの発現度合いに基づいてフローサイトメトリーにより測定されました。上の写真は、トランスフェクション後のGFPの発現を示す典型的な蛍光顕微鏡像を示しています。

製品の特徴

RJH社は、プラスミドDNAやsiRNA、mRNA、その他の核酸を用いて哺乳類細胞を改変するために、幅広く活用できるトランスフェクション試薬を開発いたしました。RJH社のトランスフェクション試薬の基盤となっているのは、正電荷と疎水性(脂質)グループのバランスが最適な陽イオン性の脂質のポリマーです。ポリマーの骨格と脂質グループの性質を体系的に変えることで、トランスフェクション試薬のライブラリが作成されました。ある種のトランスフェクション試薬は異なる細胞種や核酸で幅広く機能し、他の種類の試薬は特定の細胞種へ特定の核酸運搬に非常に効果的に機能します。

RJH社の輸送体の利点：
  • 核酸との多価の相互作用によってカーゴの強固な結合が形成され、細胞膜を通過する際の破壊的作用に耐える
  • 陽イオン性と脂質性の結合による相乗効果によりカーゴが覆われ、ヌクレアーゼから保護される
  • 脂質成分により、細胞膜との相互作用や細胞内への輸送が促される
  • pH緩衝能によりエンドソームからのカーゴの脱出が促される
  • 細胞質内に移行したフリーの核酸が目的に合わせて処理される

トランスフェクション試薬は以下の細胞モデルや用途に最適化されています。選択ガイドも併せてご覧ください。

初代細胞

接着細胞

  • VSMC (Vascular Smooth Muscle Cells)
  • HUVEC (Human Umbilical Vein Endothelial Cells)
  • Human Foreskin Fibroblast Cells
  • BMSC (Bone Marrow Stromal Cells)
  • Human Myoblasts
  • Rat Primary Sympathetic Neurons

浮遊細胞

  • UCB-MSC (Umbilical Cord Blood Derived Mesenchymal Stem Cells)
  • BM-MSC (Bone Marrow Derived Mesenchymal Stem Cells)
  • Mononuclear Cells from Leukemia Patients
  • Mononuclear Cells from Normal Human Blood
細胞株

接着細胞

  • 293-T (Kidney Fibroblast Cells)
  • MDA-231 (Breast Cancer Cells)
  • MDA-436 (Breast Cancer/ Melanoma Cells)
  • MDA-468, Sum-149PT, MCF-7 (Breast Cancer Cells)
  • A549 (Human Lung Cancer Cells)
  • MDCK (Kidney Epithelial Cells)
  • HCT-116 (Human Colon Cancer Cells)
  • C2C12 Myoblast Cells
  • MC3T3-1 (Preosteoblast Cells)
  • Green Monkey Vero Cells

浮遊細胞

  • U-937 (Human Lymphoma Cells)
  • K562 (Chronic Myeloid Leukemia Cells)
  • KG1, KG1A and THP-1 (Acute Myeloid Leukemia Cells)
  • Jurkat T-Cells
動物モデル
  • Systemic and local injection of RNAi mediator siRNA
  • Local injection of pDNA and mRNA expression vectors

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サービスの背景

RJH Biosciences社の研究開発の焦点

RJH社の注力する焦点の1つは、短鎖干渉RNA(siRNA)のデリバリーによるRNA干渉(RNAi)を実用化することです。RNAiは様々ながんや疾病の治療に用いられていますが、同社での初めての治療利用は血液がんです。他の焦点は、免疫療法で使用される、治療タンパク質を元来の位置で発現させるプラスミドDNA(pDNA)の直接投与です。

血液がんと核酸療法を用いた免疫療法を研究する理由

血液がんには白血病、リンパ腫、骨髄腫の3種類があります。白血病は、白血球の増殖能が高く、異常であるという特徴があります[1]。リンパ腫と骨髄腫はそれぞれ、免疫系に大きな影響を与えるリンパ系と形質細胞のがんです[2,3]。これら3つのがんは治療が難しく、現在の治療は特に末期がんにおいて、効果が限られています。

核酸に基づいた治療の利用は、RNAi技術と細胞に基づいた免疫治療の2つの主な方法で、これらのがんを根絶することができます。RNAiの利用は、血液がんの治療においてますます研究されています。siRNAのようなポリヌクレオチドはがん遺伝子の下方制御を補助し、個人に特異的な異常を治療するように設計され、普遍的な治療デザインと共に、個別化治療戦略として用いられます[4]。血液がん治療におけるsiRNAの可能性により、同社はがん遺伝子を標的にし、また、悪性細胞にてアポトーシスを誘導するsiRNA治療に現在注力しています。

血液がんの治療をするために研究されている他の戦略は、免疫療法の利用です。免疫治療の戦略は、抗体、幹細胞移植、サイトカイン、低分子の利用です[5]。 しかし、より最近のアプローチは、細胞移入療法(CTT)としても知られる遺伝子操作された細胞を利用する遺伝子治療です。この方法は、T細胞やB細胞、NK細胞などといった患者自身の免疫細胞を使います。免疫細胞のゲノムは、免疫細胞表面でのネオアンチゲンの発現と提示に関わる様々な免疫療法の戦略をサポートするように操作され、そしてホストへ再導入されます[5]。 遺伝子操作された細胞は最終的に、悪性細胞を標的にし、排除するように設計されています。この戦略には、血液系でT細胞が悪性細胞を‘探し出し’、破壊することができるので、高いアドバンテージがあります。このアプローチは血液がんで有望である一方で、他の固形がんでも使うことができます。免疫療法の基礎は患者の細胞への核酸の導入に依存するので、効果的な核酸のデリバリーが成功に必要不可欠です。同社のトランスフェクション試薬は、そのようなデリバリーを請け負う最高クラスの運搬体です。

核酸療法に基づくナノ医療は、がんオーダーメイド治療と免疫療法において、大きな要素です。RJH Biosciences社は、同社またはお客様のどちらの核酸であっても、上質なトランスフェクション試薬をご提供することに励みます。

Jean, C. and Dick, J. (2005) Cancer stem cells: lessons from leukemia. Trends in cell biology. 15, 494-501.
Woods, N. et al. (2006) Therapueti gene causing lymphoma. Nature. 440, 1123.
Mahindra, A. et al. (2012) Latest advances and current challenges in the treatment of multiple myeloma. Nature Reviews Clinical Oncology. 9, 135-143.
Uludağ, H. et al. (2016) Current attempts to implement siRNA-based RNAi in leukemia models. Drug Discovery Today. 21, 1412-1420.
Zou, W. (2006) Regulatory T cells, tumour immunity and immunotherapy. Nature Reviews Immunology. 6, 295-307.

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製品一覧

All-Fect

幅広い種類の細胞に対応している、pDNAやsiRNAの輸送または同時輸送用の試薬

カタログ番号 製品名 容量 濃度 Trans-Booster
10-10 All-Fect 0.75 mL 1 mg/mL –
10-20 All-Fect 1.5 mL 1 mg/mL –
10-40 All-Fect Kit 0.75 mL 1 mg/mL 0.75 mL at 0.4 mg/mL
10-50 All-Fect Kit 1.5 mL 1 mg/mL 1.5 mL at 0.4 mg/mL
10-60 ALL-Fect In Vivo Kit 1 mL 5 mg/mL 1 mL at 2 mg/mL

RJH社 製品ページ：siRNA, microRNA and ASO Delivery

Prime-Fect

導入が難しい、初代細胞や幹細胞へのトランスフェクションに特化した試薬

カタログ番号 製品名 容量 濃度 Trans-Booster
20-10 Prime-Fect 0.75 mL 1 mg/mL –
20-20 Prime-Fect 1.5 mL 1 mg/mL –
20-40 Prime-Fect Kit 0.75 mL 1 mg/mL 0.75 mL at 0.4 mg/mL
20-50 Prime-Fect Kit 1.5 mL 1 mg/mL 1.5 mL at 0.4 mg/mL

RJH社 製品ページ：Prime-Fect: Primary Cell Transfection Reagent

Leu-Fect A & B

白血病細胞や浮遊細胞へのトランスフェクションに特化した試薬

カタログ番号 製品名 容量 濃度 Trans-Booster
30-10 Leu-Fect A 0.75 mL 1 mg/mL –
30-20 Leu-Fect A 1.5 mL 1 mg/mL –
40-10 Leu-Fect B 0.75 mL 1 mg/mL –
40-20 Leu-Fect B 1.5 mL 1 mg/mL –

RJH社 製品ページ：Leu-Fect A & B: Leukaemia Cell Transfection Reagents

mRNA-Fect

mRNAの輸送に最適な、高効率のトランスフェクション試薬

カタログ番号 製品名 容量 濃度 Trans-Booster
80-10 mRNA-Fect 0.75 mL 1 mg/mL –
80-20 mRNA-Fect 1.5 mL 1 mg/mL –
80-30 mRNA-Fect In Vivo 1 mL 5 mg/mL –
80-40 mRNA-Fect Kit 0.75 mL 1 mg/mL 0.75 mL at 0.4 mg/mL
80-50 mRNA-Fect Kit 1.5 mL 1 mg/mL 1.5 mL at 0.4 mg/mL
80-60 mRNA-Fect In Vivo Kit 1 mL 5 mg/mL 1 mL at 2 mg/mL

RJH社 製品ページ：mRNA Transfection Reagents

CRISP-Fect

接着細胞や浮遊細胞へのリボ核タンパク質(RNP)の輸送に最適な、高効率のトランスフェクション試薬

カタログ番号 製品名 容量 濃度 Trans-Booster
90-10 CRISP-Fect 0.75 mL 1 mg/mL 0.75 mL at 0.4 mg/mL
90-20 CRISP-Fect 1.5 mL 1 mg/mL 1.5 mL at 0.4 mg/mL

RJH社 製品ページ：CRISPR Transfection Reagents

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トランスフェクション試薬の選択ガイド

以下の表は、細胞タイプ・核酸ごとに適したトランスフェクション試薬をまとめたものです。トランスフェクション試薬の効果は、プラスミドDNA (pDNA)、低分子干渉RNA (siRNA)、メッセンジャーRNA (mRNA)、マイクロRNA (miR)、アンチセンスオリゴヌクレオチド (ASO)、Cas9/sgRNAリボヌクレオプロテイン (RNP)を用いて評価されています。

細胞用
細胞タイプ All-Fect Leu-Fect-A Leu-Fect-B Prime-Fect mRNA-Fect CRISP-Fect
初代細胞
 臍帯血由来間葉系幹細胞 (UCB-MSC) pDNA pDNA mRNA
骨髄由来間葉系幹細胞 (BM-MSC) pDNA pDNA mRNA
血管平滑筋細胞 (VSMCs) pDNA pDNA mRNA
ヒト臍帯静脈内皮細胞 (HUVECs) pDNA mRNA
健常人および白血病患者の単核細胞 (CML, AML, ALL) siRNA siRNA mRNA
ヒト包皮線維芽細胞 pDNA pDNA mRNA
ラットの一次交感神経ニューロン pDNA mRNA
細胞株
 腎臓線維芽細胞 (293-T) pDNA pDNA
腎臓上皮細胞 (MDCK) siRNA
乳がん/黒色腫細胞 (MDA-MB-436) pDNA, siRNA siRNA mRNA RNP
乳がん細胞 (MDA-MB-231, MDA-MB-468, Sum-149PT, MCF-7) pDNA, siRNA siRNA mRNA RNP
ヒトリンパ腫細胞 (U-937) pDNA pDNA
慢性骨髄性白血病細胞 (K562) siRNA, miR mRNA
急性骨髄性白血病細胞 (KG1, KG1A, THP-1, MV4-11, MOLM-13) siRNA mRNA
急性リンパ性白血病 (RS;4-11) siRNA
ヒト肺がん細胞 (A549, Calu-3, H1975) pDNA, siRNA siRNA mRNA
ヒト大腸がん (HCT-116) pDNA siRNA mRNA
ヒト筋芽細胞 ASO
Jurkat細胞 pDNA mRNA
神経細胞株 N2A-97Q pDNA siRNA pDNA mRNA
動物モデル用
設定 All-Fect Leu-Fect-A Leu-Fect-B mRNA-Fect
宿主組織内への局所的な注射 pDNA siRNA siRNA mRNA
全身性の注射 (IV, SC, IP) pDNA siRNA siRNA mRNA
局所的な移植 (親細胞に最適化された試薬) pDNA siRNA siRNA mRNA
全身性の移植 (親細胞に最適化された試薬) pDNA siRNA siRNA mRNA
マトリクスと共に移植 pDNA mRNA

※ 試薬は、げっ歯類モデルを用いて上記の設定でテストされています。移植モデルは、マウス内で局所的（皮下）または静脈内注射後に全身的に増殖したヒト細胞（異種移植）に基づいています。

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資料

使用例

Feedback from independent researchers

Implementing CRISPR-Cas9 Technology using Transfection Reagents from RJH Biosciences
Killing Lung Cancer A549 Cells with RJH Reagents and Cytotoxic siRNAs
Transfecting Colon Cancer HCT-116 Cells with RJH Reagents to silence Polynucleotide Kinase 3′-Phosphatase (PNKP) Expression
Use of RJH Transfection Reagents in Antisense Oligonucleotide Delivery
Reagents for pDNA and siRNA delivery for TNBC cells

Application Notes

Reagents for Antisense Oligonucleotide (ASO) Delivery
Comparing Lipofection to RJH Reagents
mRNA Modification of PBMCs
mRNA-Fect Transfection Reagent to Deliver mRNA in Breast Cancer Cells
Transfecting Triple-Negative Breast Cancer MDA-MB-231 Cells with Plasmid DNA and siRNA by using ALL-Fect and Prime-Fect
Use of RJH Transfection Reagents in Co-Delivery of Plasmid DNA and short interfering RNA
RJH Transfection Reagents in siRNA Library Screens
microRNA Delivery to Leukemic Cells

Q&A

第1段階として、RJH社は、興味のある細胞が既に使用されているか確認するために、トランスフェクション試薬選択ガイドを参照することをご提案します。お客様の細胞の種類がリストに載っていない場合、類似の細胞 (接着依存/浮遊又は樹立した細胞株/初代細胞)に最適化された試薬をお使いになるか、東京未来スタイルにお問合せください。

同社は、トランスフェクション試薬の性能を最適化するために、小規模の予備実験を行うことを推奨しております。一般的なトランスフェクション試薬と同様に、複合体の形成、細胞の播種密度、培養とインキュベーションの条件が最終結果に影響を及ぼします。トランスフェクションの最適化について、同社のテクニカル・シートを参照ください。
さらに詳しく

各製品ページにそれぞれのトランスフェクションのプロトコルのコピーがあります。下記からでもご覧いただけます:

All-Fectトランスフェクション・プロトコル

Prime-Fectトランスフェクション・プロトコル

Leu-Fect Aトランスフェクション・プロトコル

Leu-Fect Bトランスフェクション・プロトコル

Trans-Boosterトランスフェクション・プロトコル

In Vivo DNA-Fectトランスフェクション・プロトコル

In Vivo RNA-Fectトランスフェクション・プロトコル

mRNA-Fectプロトコル

CRISP-Fectプロトコル

同社のトランスフェクション試薬は、DMEM、RPMI、MEMなどを含む広い範囲の血清フリーの培地で使用できます。複合体は血清含有培地で機能します。

推奨する核酸とトランスフェクション試薬の比率は、比較的有毒の試薬の場合で1:1 (w/w)から、生体に適した試薬の場合で5~20:1となります。この比率は用途ごとに最適化されなければなりません。各試薬の推奨する範囲は、それぞれの試薬のマニュアルをご参照ください。

いいえ。処理した細胞から複合体を取り除く必要はありません。複合体は細胞と共に分析の終わりまで培養中に残しても構いません。

用途によって、インキュベーション時間は2時間から24時間で変わります。トランスフェクションの工程を加速させ、複合体のインキュベーション時間を最小限にするために、細胞を遠心分離することも可能です。

トランスフェクション効率は異なるアプローチで測定できます。GFPやRFPといったレポーター遺伝子は、顕微鏡またはフローサイトメトリー技術の使用でトランスフェクションを評価するために便利な方法です。誘導された遺伝子産物(例: ELISAやウェスタンブロットによって)、または、抑制された遺伝子の発現(タンパク質またはmRNAの濃度)の直接的な評価は重要です。機能的な結果をトランスフェクションの間接的な測定に使用することも可能ですが、この場合は複雑な要因に注意が必要です。全ての研究において、研究されている核酸に類似したコントロール(いわゆる非活性)試薬を使うことをお勧めします。

‘トランスフェクションを向上させるテクニカルチップ’に概説されているように、トランスフェクションに関わる因子の体系的な分析が手始めとして良いです。トランスフェクション効率を向上させる他のリソースは、同社の‘推奨文献’のタブでご確認いただけます。疑問点があれば、東京未来スタイルにお問合せください。

全てのトランスフェクション試薬は、使用する量に依存してある程度の細胞毒性を示します。顕著な細胞の生理学的崩壊なしでトランスフェクションを行うことが重要です。不要な曝露を減らすために、トランスフェクションの複合体に曝露される時間を最小限にし、遠心分離によってトランスフェクションの工程をスピードアップさせ、試薬/核酸の濃度を最適化することができます。核酸の純度も不測の毒性を排除するためには重要です。

これらは、トランスフェクション効率に影響を及ぼす重要な基準です。一般的に、細胞密度と継代数が増加すると、細胞が老化し、トランスフェクション効率は減少します。他のトランスフェクション効率に影響を与える因子については、 ‘トランスフェクションを向上させるテクニカルチップ’をご参照ください。

推奨する保管温度は4℃(短期間)または-20℃(長期間)です。試薬は上記の条件下で1年安定するよう設計されています。

同社は核酸とトランスフェクションを1:5の比率で使うことを推奨しているので、1 mlチューブ(1 mg)は1 mgの核酸を200回トランスフェクションすることに適しています。しかし、最適な比率は用途と細胞の種類によって変わります。

はい。同社の生体内用のトランスフェクション試薬は広い活性を示すので、生体外の条件下でも効果があります。

同社のトランスフェクション試薬には、異なる核酸に機能する製品もあります。これは全てに当てはまることではないですが、大半の試薬は異なる核酸を処理するようです。ALL-Fectトランスフェクション試薬はDNAとRNAの両方を処理します。

同社の試薬は、陽イオンと疎水性の最適なバランスに基づいており、多価相互作用を通じて核酸と相互作用する重合体です。これらの試薬は核酸の陰イオンの有効な濃縮を提供する一方で、哺乳類の細胞において若干の毒性を示します。

トランスフェクション試薬の調達元を示すために、試薬の名前とRJH Biosciences Inc(Edmonton, AB, Canada)から入手したことを記載してください。

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【商品取扱元】株式会社 東京未来スタイル
info@tokyofuturestyle.com
TEL：029-851-9222　FAX：029-851-9220

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